Реакция Кумбса, реакция микроагглютинации - лизиса, реакция коагглютинации

Определение:

Реакция Кумбса – специфическое взаимодействие антигенов и неполных антител, которое выявляется при помощи антиглобулиновой сыворотки.

Неполные (одновалентные) антитела – антитела, у которых функционально работающим является один активный центр молекулы. При соединении с антигенами они не образуют видимого осадка (агглютината или преципитата). Эти антитела образуются при некоторых аналогичных состояниях: резус - конфликте, аутоиммунных заболеваниях, при некоторых хронических инфекциях (бруцеллезе).

Компоненты: разобрать на примере определения антител к Rh-антигенам эритроцитов.

1. Исследуемая сыворотка, содержащая неполные антитела (из крови беременных женщин с подозрением на Rh-конфликт).

2. Эритроциты 0 группы крови, содержащие Rh+.

3. АГС (антиглобулиновая сыворотка, которую получают путем иммунизации кроликов человеческим глобулином).

Методика постановки, учет:

Реакция ставится в пробирках или полистироловых пластинах в 2 этапа:

1 этап:

- развести исследуемую сыворотку;

- добавить Rh+ эритроциты;

- инкубация 1 час при 37ºС;

- отмыть несвязавшиеся эритроциты.

2 этап:

- добавить АГС;

- инкубация 30 мин. при 37ºС.

результаты учитывают по наличию гемагглютинации: положительная реакция – “зонтик”, отрицательная – “пуговка”.

Практическое применение: используется для выявления неполных антител.

Реакция микроагглютинации – лизиса – специфическое взаимодействие антигенов и антител, выражающееся в склеивании антигенов и их последующем лизисе.

Компоненты:

1. Антиген (как правило, эталонная живая культура микроорганизма).

2. Исследуемая сыворотка.

Постановка и учет: реакцию ставят на предметном стекле и учитывают в препаратах “раздавленная капля” в темном поле.

Положительная реакция: в первых разведениях сыворотки – полное растворение микроорганизмов, потом – частичный лизис, в последующих разведениях – агглютинация микроорганизмов и появление аггломератов.

Применение: обычно применяется для серодиагностики лептоспироза и сероидентификации.

Реакция коагглютинации – специфическое взаимодействие антигенов с антителами, предварительно адсорбированными на стафилококках за счет способности стафилококкового белка неспецифически связываться с Fc-фрагментами иммуноглобулинов. При этом Fab-фрагменты остаются свободными для связывания с гомологичными антигенами, вызывая агглютинацию.

Компоненты:

1. Исследуемый материал, содержащий корпускулярные или растворимые антигены.

2. Коммерческий стафилококковый реагент (антитела, адсорбированные на стафилококках).

Реакцию ставят в полистироловых пластинах или на предметных стеклах. Инкубацию проводят при комнатной температуре (8-20 часов) или 10-30 мин. (на стеклах). Учет как при обычной РА.

Практическое применение: используют для индикации и типирования корпускулярных и растворимых антигенов при туляремии, брюшном тифе и некоторых других инфекционных заболеваниях.